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十大功勞屬植物究竟立了哪十大功勞?

來(lái)源:www.petajastudio.com   時(shí)間:2021-12-08 21:45   點(diǎn)擊:9325   編輯:niming   手機(jī)版

十大功勞屬(Mahonia)植物在我國(guó)約有50種,分布于南方各地。該屬植物主要以根、莖入藥,稱(chēng)“刺黃連、刺黃柏、功勞木”等;有的地區(qū)以葉入藥,稱(chēng)“功勞葉”〔1,2〕。有的用作提取“黃連素”、異漢防己甲素(isotetrandrine)的原料。已從該屬植物中發(fā)現(xiàn)20多種芐基異喹啉類(lèi)生物堿,其中雙芐基異喹啉類(lèi)的尖刺堿(oxyacanthine,Ⅰ)、小檗胺(berbamine,Ⅱ)、異漢防己甲素(Ⅴ)和原小檗堿類(lèi)的小檗堿(berberine,Ⅶ)、藥根堿(jatrorrhizine,Ⅳ)、巴馬亭(palmatine,Ⅵ)、非洲防己胺(columbamine,Ⅲ)等成分分布廣泛,含量較高?,F(xiàn)代藥理實(shí)驗(yàn)和臨床應(yīng)用結(jié)果表明,這些成分具有抗菌、消炎、抗病毒、降血壓、降血脂、抗心率失常、抗血小板聚集、抗衰老、鎮(zhèn)痛等生理活性〔3~11〕。
  對(duì)十大功勞屬植物中生物堿成分測(cè)定的文獻(xiàn)報(bào)道較少。有文獻(xiàn)報(bào)道用薄層掃描法測(cè)定大葉刺黃柏中的Ⅳ、Ⅵ、Ⅶ〔12〕;用薄層光密度法測(cè)定4種十大功勞屬植物莖中的Ⅳ、Ⅵ、Ⅶ、木蘭花堿(magnoflorine)〔13〕;用高效液相色譜法測(cè)定十大功勞葉中的Ⅶ〔14〕。作者在用變波長(zhǎng)高效液相色譜法測(cè)定了小檗屬(Berberis)植物根中的生物堿的基礎(chǔ)上〔15〕,為了開(kāi)發(fā)利用十大功勞屬植物資源,建立了高效液相色譜法測(cè)定十大功勞屬植物中的Ⅰ~Ⅶ的方法。這7種成分可用203 nm固定波長(zhǎng)1次檢測(cè),也可用203~346nm變波長(zhǎng)2次檢測(cè)。但后者既使7種待測(cè)成分在各自的最大吸收波長(zhǎng)處檢測(cè),又避免了吸收波長(zhǎng)不同的相鄰色譜峰的干擾,提高了分析的靈敏度和準(zhǔn)確度。本文用變波長(zhǎng)高效液相色譜法對(duì)我國(guó)產(chǎn)的十大功勞屬3種植物的根、根皮、根木、莖皮、莖木和10種不同產(chǎn)地的植物根中的Ⅱ、Ⅳ、Ⅵ、Ⅶ進(jìn)行了定量分析,Ⅰ、Ⅲ、Ⅴ因?qū)φ掌妨可?,只做了定性分析?br>
  1 儀器與試藥
  Waters高效液相色譜儀(510型泵,490E檢測(cè)器,U6K進(jìn)樣器,Baseline 810色譜工作站)。
  對(duì)照品:鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬亭、鹽酸藥根堿購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品檢定所;非洲防己胺由中國(guó)藥品生物制品檢定所涂國(guó)士研究員贈(zèng)送;小檗胺購(gòu)于中國(guó)科學(xué)院林業(yè)土壤研究所,經(jīng)重結(jié)晶純化;尖刺堿、異漢防己甲素由中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物研究所提供(所用對(duì)照品經(jīng)硅膠薄層層析、2種溶劑系統(tǒng)展開(kāi)為單點(diǎn);高效液相色譜法測(cè)定,主成分的峰高、峰面積均在97%以上)。植物標(biāo)本由中國(guó)科學(xué)院植物研究所應(yīng)俊生研究員鑒定。乙腈為色譜純,甲醇和磷酸二氫鉀為分析純,去離子水。

  2 實(shí)驗(yàn)方法及結(jié)果
  2.1 色譜條件〔15〕
  色譜柱:μ-Bondapak phenyl(10μm,3.9mm×300mm,美國(guó)Waters公司);流動(dòng)相:0.02mol.L-1磷酸二氫鉀-乙腈(7∶3);柱溫:室溫;流速:1.0mL.min-1;靈敏度:0.08AUFS;檢測(cè)波長(zhǎng):固定波長(zhǎng)用203nm,變波長(zhǎng)0.0~10.0min用203nm,10.0min以后用346 nm。7種生物堿對(duì)照品的色譜圖見(jiàn)圖1。

  圖1 7種生物堿對(duì)照品的色譜圖(203 nm檢測(cè))
 ?、?尖刺堿 Ⅱ.小檗胺 Ⅲ.非洲防己胺Ⅳ.藥根堿
  Ⅴ.異漢防己甲素 Ⅵ.巴馬亭 Ⅶ.小檗堿

  2.2 回歸方程及線性范圍
  按文獻(xiàn)〔15〕,以進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)(X),峰面積(microvolt-sec)為縱坐標(biāo)(Y),求得回歸方程見(jiàn)表1。
  2.3 樣品溶液的制備
  精密稱(chēng)取干燥樣品粉末0.1g于50mL磨口三角瓶中,加甲醇20mL,稱(chēng)重,浸泡12h,超聲提取60min,稱(chēng)重,補(bǔ)足損失的甲醇,搖勻,密閉,靜置;取5.0mL上清液于離心管中,密閉,離心(10000r.min-1,10min);取上清液(2.0mL)作為樣品溶液。

  表1 4種生物堿定量分析的回歸方程和線性范圍

  成分
  回歸方程
  r
  線性范圍/μg

 ?、?br>  Y=9.017X×104+4.318×105
  0.9993(n=7)
  0.019~0.296

 ?、?br>  Y=4.239X×104-8.228×104
  0.9999(n=9)
  0.019~0.996

 ?、?br>  Y=4.191X×104+1.446×105
  0.9998(n=9)
  0.020~1.008

 ?、?br>  Y=4.209X×104+1.278×105
  0.9998(n=9)
  0.020~1.010

  2.4 精密度試驗(yàn)〔15〕
  精密吸取一樣品溶液10μL進(jìn)樣,重復(fù)測(cè)定10次。求得樣品中各成分濃度(μg.mL-1)的RSD(%):小檗胺 0.28,藥根堿 0.84,巴馬亭 0.75,小檗堿 1.21。
  2.5 加樣回收率試驗(yàn)
  分別精密稱(chēng)取狹葉十大功勞莖的干燥粉末0.05g5份于50mL磨口三角瓶中,按文獻(xiàn)〔15〕操作,每份重復(fù)測(cè)定3次;計(jì)算Ⅱ、Ⅳ、Ⅵ、Ⅶ的回收率,分別為97.2%~102.1%、98.9%~100.3%、97.2%~100.1%、99.4%~100.1%,RSD分別為2.0%、0.62%、1.3%、0.30%。
  2.6 樣品分析〔15〕
  精密吸取樣品溶液10μL進(jìn)樣,用203~346nm變波長(zhǎng)檢測(cè),對(duì)Ⅱ、Ⅳ、Ⅵ、Ⅶ進(jìn)行了定量分析,對(duì)Ⅰ、Ⅲ定性分析。再精密吸取10μL進(jìn)樣,用203nm固定波長(zhǎng)檢測(cè),得到各樣品的特征圖譜,并定性分析成分Ⅴ。對(duì)十大功勞屬3種植物的根、根皮、根木、莖皮、莖木和10種不同產(chǎn)地的植物根中的7種生物堿的分析結(jié)果見(jiàn)表2、3。

  3 討論
  3.1 本文建立的方法能在同一個(gè)色譜條件下25min

  表2 3種十大功勞屬(Mahonia)植物不同部位7種生物堿分析結(jié)果(%,n=2)

  植物名稱(chēng)
  部位
 ?、?br>  Ⅱ
 ?、?br> ?、?br> ?、?br>  Ⅵ
 ?、?br>
  甘平十大功勞 Mahonia eurybracteata Fedde subsp.ganpinensis(H.Leveill)T.S.Ying et Boufford
  (四川省中藥學(xué)校)
  根
  -
  ±
  +
  0.68
  +
  0.05
  0.78

  根皮
  +
  0.01
  -
  1.66
  +
  0.14
  3.76

  根木
  +
  ±
  +
  0.69
  +
  0.06
  0.84

  莖皮
  -
  ±
  -
  0.34
  +
  0.05
  0.47

  莖木
  +
  ±
  -
  0.53
  +
  0.08
  0.21

  狹葉十大功勞 M.fortunei(Lindl.)Fedde
  (重慶南川藥物種植所)
  根
  +
  0.34
  +
  1.17
  +
  0.06
  1.27

  根皮
  +
  0.98
  +
  3.02
  +
  0.20
  3.54

  根木
  +
  0.18
  +
  0.54
  +
  ±
  0.70

  莖皮
  +
  0.29
  +
  1.47
  +
  0.19
  0.41

  莖木
  +
  0.28
  +
  0.98
  +
  0.05
  1.36

  長(zhǎng)苞十大功勞 M.longibracteata Takeda
  (四川峨邊)
  根
  +
  ±
  +
  0.40
  +
  0.62
  1.73

  根皮
  +
  ±
  +
  1.10
  +
  1.30
  6.94

  根木
  -
  ±
  +
  0.33
  +
  0.80
  0.98

  莖皮
  -
  ±
  +
  0.74
  -
  0.60
  1.24

  莖木
  -
  -
  +
  0.21
  -
  0.28
  0.45

  +:檢出該成分 -:未檢出該成分 ±:含量<0.01%

  表3 10種十大功勞屬(Mahonia)植物根中7種生物堿分析結(jié)果(%,n=2)

  植物名稱(chēng)
  產(chǎn)地
  Ⅰ
 ?、?br> ?、?br> ?、?br> ?、?br> ?、?br>  Ⅶ

  闊葉十大功勞 Mahonia bealei(Fort.)Carr.
  四川峨邊
  +
  ±
  +
  0.44
  +
  0.78
  1.44

  重慶奉節(jié)
  +
  0.02
  +
  0.50
  +
  0.64
  2.07

  鼠刺十大功勞 M.bodinieri Gagnep.
  重慶金佛山
  +
  0.10
  +
  0.81
  +
  0.09
  0.77

  重慶藥物種植所
  +
  0.08
  +
  0.79
  +
  0.06
  1.11

  重慶中藥研究院
  +
  ±
  +
  0.41
  +
  0.05
  0.78

  湖南新化*
  +
  ±
  +
  0.16
  +
  0.53
  1.44

  川鄂十大功勞M.eurybracteata Fedde subsp.eurybracteata
  四川峨眉山
  -
  ±
  +
  0.45
  +
  0.14
  1.10

  四川峨邊
  -
  ±
  +
  0.82
  +
  0.12
  1.22

  重慶縉云山
  +
  ±
  +
  0.35
  +
  0.02
  0.73

  甘平十大功勞 M.eurybracteata Fedde subsp.ganpinensis(H.Leveill)T.S.Ying et Boufford
  重慶南川
  +
  0.01
  +
  1.01
  +
  0.04
  1.58

  四川省中藥學(xué)校
  -
  ±
  +
  0.68
  +
  0.05
  0.78

  狹葉十大功勞 M.fortunei(Lindl.)Fedde
  重慶藥物種植所
  +
  0.34
  +
  1.17
  +
  0.06
  1.27

  四川峨眉山
  +
  ±
  +
  0.82
  +
  0.06
  1.42

  湖南新化*
  +
  0.19
  +
  0.88
  +
  0.07
  0.59

  細(xì)梗十大功勞 M.gracilipes(Oliv.)Fedde
  四川峨眉山
  -
  ±
  +
  0.67
  +
  0.15
  0.99

  長(zhǎng)苞十大功勞M.longibracteata Takeda
  四川峨邊
  +
  ±
  +
  0.40
  +
  0.62
  1.73

  巖紫黃 M.nitens Schneid.
  四川峨眉山
  -
  0.02
  +
  1.05
  +
  0.17
  0.55

  多齒十大功勞 M.polyodota Fedde
  四川峨眉山
  -
  0.02
  +
  0.67
  +
  0.10
  0.52

  重慶金佛山
  -
  0.01
  +
  0.22
  +
  0.13
  0.30

  M.sp.(未定種名)
  重慶金佛山
  -
  0.01
  +
  0.28
  +
  1.38
  1.30

  +:檢出該成分 -:未檢出該成分 ±:含量<0.01% *:測(cè)定部位是莖

  內(nèi)測(cè)定十大功勞屬植物不同部位以及不同產(chǎn)地植物中的Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ 3種雙芐基異喹啉類(lèi)和Ⅲ、Ⅳ、Ⅵ、Ⅶ 4種原小檗堿類(lèi)生物堿。方法的重現(xiàn)性好、精密度高、適用范圍廣。
  3.2 十大功勞屬與小檗屬植物親緣關(guān)系相近,化學(xué)成分相似。研究結(jié)果表明:能用相同或相近的HPLC色譜條件測(cè)定這兩屬植物中相同的生物堿成分。
  3.3 在所測(cè)定的10種植物中,Ⅲ的峰很低,參照Ⅳ、Ⅵ、Ⅶ的分子結(jié)構(gòu)和峰面積,推測(cè)Ⅲ的含量低于0.01%。Ⅰ和Ⅱ除狹葉十大功勞外,在其余植物中的峰較弱,含量較低;Ⅴ的峰在大多數(shù)植物中很強(qiáng),含量高(本實(shí)驗(yàn)中因?qū)φ掌妨可?,未定?。
  3.4 這7種成分在該屬植物不同部位中的分布、含量有一定差別,其差異程度隨植物種類(lèi)不同而異。含量基本上以根皮中最高,莖皮中次之,然后是根木部、莖木部。以往多以莖入藥〔1〕,但從分析結(jié)果看,其根也是不可忽視的資源。

  作者單位:呂光華 華西醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院 成都610044
  王立為 陳立民 肖培根 中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)、中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物研究所北京100094

  參考文獻(xiàn)
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  14 陳?ài)品?,黃新生.反相高效液相色譜法測(cè)定十大功勞葉中小檗堿的含量.中成藥,1997,19(12):36
  15 呂光華,陳建民,肖培根.改變檢測(cè)波長(zhǎng)HPLC法測(cè)定小檗屬植物中的生物堿.藥學(xué)學(xué)報(bào),1995,30(4):280

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