一、如何利用動物細(xì)胞培養(yǎng)來生產(chǎn)病毒疫苗?

這問題有些混亂，你想表達什么意思？?動物細(xì)胞培養(yǎng)是從動物機體中取出相關(guān)的組織，將它分散成單個細(xì)胞（使用胰蛋白酶或膠原蛋白酶）然后，放在適宜的培養(yǎng)基中，讓這些細(xì)胞生長和增殖。此技術(shù)可應(yīng)用于 生物制品的生產(chǎn)，如制備單克隆抗體。疫苗是滅活的病毒，抗原刺激機體產(chǎn)生抗體，抗體消滅病毒。提取病毒滅活就可以了，跟細(xì)胞培養(yǎng)關(guān)系不大....

二、養(yǎng)殖羊的一些防疫技術(shù)和疫苗種類及價格.

羊疫病防治技術(shù)、各類疫苗你可以去中國畜牧www.xumuj.com看看，各種獸藥公司都在上面注冊了，這方面的信息很全。

三、在動物學(xué)檢驗檢疫中有哪些常用的免疫血清學(xué)技術(shù)和分子生物學(xué)技術(shù)

在動物學(xué)檢驗檢疫中有哪些常用的免疫血清學(xué)技術(shù)和分子生物學(xué)技術(shù)

分子診斷學(xué)的研究范疇包括：利用遺傳學(xué)、病理學(xué)、免疫學(xué)、生物化學(xué)、基因組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)和分子生物學(xué)的理論和方法探討疾病發(fā)生和發(fā)展的分子機制。為整個疾病過程尋求特異的分子診斷指標(biāo)，以及利用分子生物學(xué)技術(shù)為這些分子診斷指標(biāo)建立臨床實用的檢測方法。

四、動物打疫苗的免疫學(xué)基礎(chǔ)理論是什么？？用免疫學(xué)專業(yè)知識回答，求高人解答?。?！

動物疫苗屬獸用生物制品的范疇，獸用生物制品是生物制品學(xué)的重要組成部分。獸用生物制品學(xué)的內(nèi)容和任務(wù)是：研究用于動物傳染病預(yù)防疫苗的制備理論與技術(shù)；研究用于動物傳染病診斷制品的制備理論與技術(shù)；研究治療動物疾病的免疫制劑的理論與技術(shù)；以及這些制品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，檢驗方法和發(fā)酵、凍干等工程學(xué)理論與工藝。

一、動物疫苗的基礎(chǔ)—微生物學(xué)、傳染病學(xué)及免疫學(xué)的有關(guān)理論

1 微生物及病原微生物

1.1 微生物：微生物是一群結(jié)構(gòu)簡單、繁殖快、分布廣，個體最小的生物。

1.2 微生物的分類：微生物依其形態(tài)結(jié)構(gòu)和生物特性可以分為細(xì)菌、真菌（酵母菌、霉菌）、放線菌、螺旋體、支原體、立克次氏體、衣原體、病毒八大類。

1.3 病原微生物：微生物種類繁多，但不是所有的微生物對動物有害，相反，大多數(shù)微生物對動物都有利，對這類微生物，我們稱為非病原微生物。但是，有少數(shù)微生物可以引起動物發(fā)生這樣或那樣的病理損害，我們稱這類微生物為病原微生物。

2 傳染與免疫：

2.1 傳染與傳染?。簜魅臼侵竸游飳Σ≡⑸锏娜肭炙憩F(xiàn)的不同程度的感受性。病原微生物在被感染動物的機體內(nèi)得到繁殖，并由此感染動物傳染給其它有感受性的動物并發(fā)生同樣的疾病，這樣能形成傳染的疾病叫做傳染病。

2.2 免疫：動物體對病原微生物的入侵所表現(xiàn)的不同程度的抵抗性，即動物體對入侵的病原微生物所具有的抵抗力。

2.3 傳染與免疫的辨證關(guān)系：傳染和免疫是一個統(tǒng)一的過程，當(dāng)機體受到病原微生物的入侵，因病原微生物的作用使正常的生理平衡失調(diào)；與此同時，機體動員一切防御因素，抗擊病原微生物的侵害，經(jīng)機體的生理改造，傳染向免疫轉(zhuǎn)化，機體逐步建立起免疫狀態(tài)?？梢?，傳染和免疫不是彼此孤立，而是相互聯(lián)系，相互制約的統(tǒng)一過程。

3 獸用生物制品的概念：

獸用生物制品是根據(jù)免疫學(xué)原理，利用微生物、寄生蟲及其代謝產(chǎn)物或免疫應(yīng)答產(chǎn)物制備的一類物質(zhì)。這類物質(zhì)專供動物相應(yīng)疾病的診斷、治療或預(yù)防之用。從狹義上講，可將用于動物疾病診斷、檢疫、治療和免疫預(yù)防的診斷液、疫苗和抗病血清稱為獸用生物制品；從廣義上講，又可將血液制品、臟器制劑和非特異性免疫制劑（干擾素、促菌生、丙種球蛋白等）列入生物制品。由此可見，獸醫(yī)生物制品的涵義和內(nèi)容隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展而成為獸醫(yī)保健制品。

五、請問檢測動物機體免疫功能的方法都有哪些？

細(xì)胞免疫（CMⅠ）是由多種細(xì)胞相互作用的結(jié)果。免疫細(xì)胞間相互作用導(dǎo)致多種細(xì)胞因子的釋放。因此細(xì)胞功能測定不僅涉及T細(xì)胞的數(shù)量和功能與包括各類因子活性測定，因此評價機體的細(xì)胞免疫功能不僅程序復(fù)雜，且很難標(biāo)準(zhǔn)化

一、遲發(fā)型過敏反應(yīng)的體外檢測方法

皮膚試驗和接觸性過敏的誘發(fā)是檢測遲發(fā)型過敏反應(yīng)（DTH）的兩種常用方法。皮膚試驗中誘發(fā)對曾經(jīng)使病人致敏的抗原的再次應(yīng)答，而接觸性過敏是測試受者對從未接觸過的物質(zhì)發(fā)生致敏的能力。

1．皮膚試驗 用皮膚試驗診斷DTH，常用的抗原有結(jié)核菌純蛋白衍生物（PPD）、腮腺炎病毒、念珠菌素等，在人類試驗時在前臂皮內(nèi)注射少量可溶性抗原，24～48小后，測量紅腫硬結(jié)的大小，硬結(jié)直徑大于10mm即被看作為陽性。表明受試者對該病原菌有了一定的細(xì)胞免疫能力，若皮試無反應(yīng)，可用更高濃度的抗原重復(fù)試驗，若仍無反應(yīng)即為陰性，需排除皮試技術(shù)誤差，也可能受試者從未接觸過此抗原，也可能由于細(xì)胞免疫功能缺損，或由于細(xì)胞免疫功能缺損，或由于嚴(yán)重感染（麻疹、慢性播散性結(jié)核）造成的無反應(yīng)性。

2．接觸性過敏常應(yīng)用低分子量化合物如二硝基氯苯（DNCB）誘生接觸性過敏。化合物與皮膚蛋白質(zhì)結(jié)合而導(dǎo)至DTH反應(yīng)。在動物試驗時，初次皮膚上涂抹DNCB后間隔7～10天再激發(fā)刺激，則皮膚出現(xiàn)即為陽性。此試驗人類已不使用。

二、細(xì)胞免疫的體外檢測方法

體外檢測淋巴細(xì)胞的數(shù)量和功能，最易采集的是血標(biāo)本，首先需分離或純化淋巴細(xì)胞，一般使用萄聚糖-泛影葡胺配成比重為1.077的淋巴細(xì)胞分層液，當(dāng)將血液重疊于淋巴細(xì)胞分層液之上離心時，由于紅細(xì)胞（1.092）、多形核白細(xì)胞（1.090）、淋巴細(xì)胞（1.070）的比重不同而相互分開。淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞在血漿和分層液交界處形成一薄層。仔細(xì)分出這一薄層的細(xì)胞，其中淋巴細(xì)胞占80%，單核細(xì)胞占20%，淋巴細(xì)胞中T細(xì)胞占80%，B細(xì)胞占4%～10%，其作為非DT、非B細(xì)胞。

1．T細(xì)胞計數(shù)

（1）E花環(huán)法：人類T細(xì)胞表面有SRBC受體（CD2）能與SRBC結(jié)合形成玫瑰花環(huán)樣結(jié)構(gòu)，將經(jīng)分層液分離現(xiàn)的RBM懸液與SRBC在含有血清的平衡鹽水中混合，經(jīng)37℃培養(yǎng)5～10分鐘放4℃過夜，取細(xì)胞懸計數(shù)，外周血淋巴細(xì)胞中約70%～80%淋巴細(xì)胞結(jié)成花環(huán)即為T細(xì)胞。目前此方法已用來分離T細(xì)胞，而不用做T細(xì)胞計數(shù)。

（2）用單克隆抗體計數(shù)T細(xì)胞：將人的PBM分成三等份，分別用小鼠抗人CD3、CD4和CD8的單克隆抗體作第一抗體與細(xì)胞結(jié)合，再用FITC標(biāo)記的兔抗小鼠IgG抗體作第二抗體進行間接免疫熒光染色，在熒光顯微鏡下或流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果，在PBM中被CD3抗體染上熒光的細(xì)胞稱為CD3+細(xì)胞即總T細(xì)胞。正常人在PBM中T細(xì)胞占70%～80%。正常人的CD4+細(xì)胞和CD8+細(xì)胞之和應(yīng)與CD3+細(xì)胞數(shù)一致。CD4+細(xì)胞與CD8+細(xì)胞的比值正常人約為2/1而艾滋病患者則比值小于1.7。

2．T細(xì)胞活化試驗 T細(xì)胞能被非特異的物質(zhì)稱為有絲分裂原所激活而向淋巴母細(xì)胞轉(zhuǎn)化。T細(xì)胞轉(zhuǎn)化過程可伴隨有DNA、RNA、蛋白質(zhì)的合成增加，最圖導(dǎo)致細(xì)胞分裂。在光學(xué)顯微鏡下可計數(shù)轉(zhuǎn)化后的淋巴細(xì)胞數(shù)，也可用氚標(biāo)記的胸腺嘧啶核苷（3HTdR）摻入正在分裂的淋巴細(xì)胞，用液閃測定儀檢查摻入正在分裂的淋巴細(xì)胞，用液測量儀檢查摻入的3H-TdR的多少確定淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率。最近有一種不用同位素，又可用儀器測量的淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)的檢查法，稱為MTT檢測法，MTT是一種甲氮唑鹽，它是細(xì)胞線粒體脫氫酶的底物，細(xì)胞內(nèi)的酶可將MTT分解產(chǎn)生藍黑色甲（fromazan）產(chǎn)物。該產(chǎn)物的多少與活性細(xì)胞數(shù)正相關(guān)。結(jié)果可用酶標(biāo)檢測儀（595mm）測量匯豐銀行密度，做為MTT法的檢查指標(biāo)。此法的結(jié)果與3H-TdR摻入法平行，并能反應(yīng)試驗中的活細(xì)胞數(shù)（表20-3）。

表20－3 淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)的刺激物

分裂原

T細(xì)胞

B細(xì)胞

植物血凝素（PHA）

+

－

刀豆蛋白A（ConA）

+

－

美洲商陸（PWM）

+

+

葡萄球菌蛋白A（SPA）

±＊

+

副傷寒桿B（SPB）

±

+

注： PWH主要是T細(xì)胞分裂原，也可通過刺激T細(xì)胞分泌可溶性因子誘導(dǎo)B細(xì)胞增殖分化；

＊SPA誘導(dǎo)B細(xì)胞分裂不需要T細(xì)胞協(xié)助，但誘導(dǎo)B細(xì)胞激活抗體分泌細(xì)胞需要T細(xì)胞協(xié)助

3．細(xì)胞毒試驗 TC細(xì)胞、NK細(xì)胞、LAK細(xì)胞、TIL細(xì)胞對其靶細(xì)胞有直接的細(xì)胞毒（殺傷）作用。常用的栓測細(xì)胞毒效應(yīng)的方法是51Cr-Na2Cro4鹽水溶液與靶細(xì)胞胞混合，于37℃培養(yǎng)1小時左右，51Cr即可進入靶細(xì)胞，與胞漿蛋白結(jié)合，洗去游離的51Cr后，即可得到51Cr標(biāo)記的靶細(xì)胞，將待檢細(xì)胞毒性的細(xì)胞與51Cr標(biāo)記的靶細(xì)胞混合（比例約為50：1或100：1）靶細(xì)胞被殺傷越多，釋放到上清液中的液游離的51Cr越多，且不能被其他細(xì)胞吸收。用γ射線測量儀檢測上清液中的cpm值，即可計算出待檢細(xì)胞殺傷活性的高低。

細(xì)胞毒試驗檢測Tc細(xì)胞效應(yīng)功能是否健全，及經(jīng)IgG介導(dǎo)的ADCC效應(yīng)，或NK細(xì)胞在抗腫瘤免疫中的作用是有意義的。

4．混合淋巴細(xì)胞的反應(yīng)（MIR） 是體外研究T細(xì)胞的較好的方法，雙向MLR常被用來篩選骨髓移植的供體。來自不同供體的淋巴細(xì)胞分別與病人的淋巴細(xì)胞混合培養(yǎng)4～5天，在最后8小時摻入51TdR摻入法測T細(xì)胞的反應(yīng)性?；蛴眉?xì)胞毒法觀察受刺激的T細(xì)胞與活的靶細(xì)胞混合（靶細(xì)胞來自與刺激細(xì)胞相同的個體）如果T細(xì)胞受刺激后產(chǎn)生了細(xì)胞毒T細(xì)胞，可殺死活的細(xì)胞，根據(jù)靶細(xì)胞釋放51Cr的多少算出T細(xì)胞移動抑制因子）和LIF（白細(xì)胞移動抑制因子）來評估細(xì)胞免疫功能。近年來應(yīng)用測定IL-2的免疫酶技術(shù)，操作簡單，并能定量以取代了MIF和LIF的測定。單個核細(xì)胞與分裂原一起培養(yǎng)24小時，然后測定清液中的IL-2活性。在細(xì)胞免疫功能缺損時，特別是AIDS病人，IL-2分泌明顯降低。而有些疾病，如多發(fā)性硬化、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、移植排斥反應(yīng)等病人體內(nèi)血清中IL-2水平升高，表明病人T細(xì)胞活性增高。發(fā)生移植排斥反應(yīng)的病人尿中IL-2也可升高。

也可用酶聯(lián)免疫吸附試驗測定各種體液中活化的T細(xì)胞脫落的IL-2受體（CD25），一般來說IL-2的水平和IL-2受體水平是平行的，IL-2和IL-2受體的檢測可用于對某些疾病的監(jiān)測，如移桿排斥、自身免疫病以及接受免疫抑制治療的病人。

對體外培養(yǎng)的細(xì)胞進行細(xì)胞因子產(chǎn)生能力檢測是檢查細(xì)胞培養(yǎng)上清液中細(xì)胞因子的生物活性或抗原性。現(xiàn)已可用核酸雜交技術(shù)，即從組織中或細(xì)胞中提取RNA，與同位素或酶標(biāo)記的該種細(xì)胞因子的cDNA探針作分子雜交試驗，即印跡（dot blotting）或Northern印跡，若查出有某種因子的mRNA存在，即說明該細(xì)胞在所處培養(yǎng)條件下有產(chǎn)生某種細(xì)胞因子的能力。